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1. 作补体细胞毒性实验为什么用冷hank液;室温的会有什么问题?
2. Percoll和普通的淋巴细胞分离液有什么不同
3. 细胞毒试验简介

1、作补体细胞毒性实验为什么用冷hank液;室温的会有什么问题?

补体介导的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity test）的原理是特异性抗体与细胞膜上相应抗原结合后，在补体的参与下，可产生细胞膜损伤，细胞死亡；不带相应抗原的细胞仍然存活。

含义不同：PBS为磷酸缓冲盐溶液，D-Hanks液为（不含有钙和镁离子）平衡盐溶液。

室温下，在实验室严格控制的组织培养液的环境中的HIV可以存活15天。一些研究机构证明 ，离体血液中HIV的存活时间决定于离体血液中病毒的含量，病毒含量高的血液，在未干的情况下，即使在室温中放置96小时，仍然具有活力。

实验室内常将胰蛋白酶和EDTA联合使用。可提高消化效率，细胞分散情况改善。EDTA不能被血清抑制，所以消化后必须彻底清洗。EDTA对成纤维细胞作用差。

2、Percoll和普通的淋巴细胞分离液有什么不同

该法是纯化淋巴细胞和单核细胞的一种较好的方法，淋巴细胞纯度高达98%，单核细胞纯度可达78%。

percoll是一种经聚乙烯吡喀烷酮pvp处理的硅胶颗粒，对细胞无毒。利用percoll液经高速离心后形成一个连续密度梯度的原理，将密度不等的细胞分离纯化。

Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（20mosm／kg H2O）， 粘度也很小，可形成高达3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力（200～1000g）于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。

Percoll是经过聚乙烯吡咯烷酮 （polyvinyl pyrolidone， PVP） 处理的硅胶颗粒混悬液，对细胞无毒性和刺激性。Percoll混悬液的硅胶颗粒大小不一，经过高速离心后，可形成一个连续密度梯度，将比重不同的细胞分离纯化。

3、细胞毒试验简介

每孔加兔补体5μl，充分混匀，室温培养1h，B细胞2h。（6）每孔加入5％伊红Y3μl，作用1～3min。（7）每孔加入12％福马林8μl，室温静置1～2h或4℃冰箱过夜，置显微镜下观察结果。

细胞毒T淋巴细胞（CTL介导的试验）：细胞毒T淋巴细胞（CTL介导的试验）能够确定细胞毒T细胞溶解致敏的同源性靶细胞或特异性靶细胞的能力。

补体介导的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity test）的原理是特异性抗体与细胞膜上相应抗原结合后，在补体的参与下，可产生细胞膜损伤，细胞死亡；不带相应抗原的细胞仍然存活。

细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法。MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测。

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