核细胞的分离应用(细胞核的分离原理)
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于核细胞的分离应用的问题,于是小编就整理了3个相关介绍核细胞的分离应用的解答,让我们一起看看吧。
1、如何分离PBMC
从PBMC中分离淋巴细胞的方法有:(1)贴壁粘附法;(2)吸附柱过滤法;(3)磁铁吸引法;(4)Percoll分离液法。
加入10mL PBS,离心300g×10分钟,洗涤细胞两次。 末次离心后,弃上清,加入含有10%FBS的RPMI1640,重悬细胞,计数,计算细胞活力。
在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 取肝素抗凝静脉皿与等量Hank‘s液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。
如何从浓缩的白细胞中高效的分离PBMC 。
外周血单个核细胞(PBMC)是外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是 mononuclear cell 单个核细胞,而不是 Monocyte 单核细胞。
2、分离T细胞与B细胞最简捷的方法是
正确答案:C 解析:单个核细胞的比重与红细胞、白细胞及血小板不同,可通过密度梯度离心进行分离 。T细胞表面有CD3分子,用CD3抗体包被免疫磁珠,T细胞与之结合,B细胞不能结合 。细胞经孵育再通过磁场便能分离 。
解析:放射免疫分析法(B错)、ELISA(C错)、双向琼脂扩散试验(D错)、免疫电泳(E错)都是检测抗原或抗体的体外实验,不能用来分离细胞。
流式细胞术是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型的细胞分析技术和分选技术。能精确的从混合的T、B细胞中分离T细胞,故首选A。
先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物,然后用CD4 T细胞的单抗,免疫磁珠法分离;或者利用流式细胞仪进行分选。
3、单个核细胞提取的最佳方法是什么?
析出溶解在NaCl溶液中的DNA。用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。方法步骤:1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。
分离外周血单个核细胞的方法是:聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法。利用介于两者比重之间的溶液(称为分层液)作为密度梯度离心,就可得到单个核细胞。外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。
【答案】:D 单核细胞具有黏附玻璃和塑料表面的特性,通过黏附贴壁法可去除单个核细胞中的单核细胞。
【答案】:A 单个核细胞的比重与红细胞、白细胞及血小板不同,可通过密度梯度离心进行分离。T细胞表面有CD3分子,用CD3抗体包被免疫磁珠,T细胞与之结合,B细胞不能结合。细胞经孵育再通过磁场便能分离。
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