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1. PBMC分离后有大量红细胞和细胞碎片

1、PBMC分离后有大量红细胞和细胞碎片

肝素抗凝新鲜血2ml，用2ml hanks 稀释，轻轻混匀 2 在1根10ml无菌玻璃离心管中加入以过滤过的淋巴细胞分层液2ml，层加已经稀释过的血液4ml（缓慢加入），1800rpm 20 min，吸出分离液层上的单核细胞层。

过滤器内的细胞不能够很有效的洗涤出来（这个我去医院问过，很难拆除）；洗涤出来的细胞在挤压的过程中，很容易破碎（我之前为了提高得率，会经常用空气吹打，在分离后会存在很多细胞碎片）。

PBMC分离方法是一种生物技术，它可以将多种血液成分（如红细胞、血小板和淋巴细胞）分离出来，从而获得血液中纯的单克隆T细胞。

红细胞和粒细胞 　去除部分上层液体（用移液管吸取，不可倾倒），余下约1mL，用移液器插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一15mL离心管中，加入5倍以上体积的PBS，离心300g×10分钟，洗涤细胞两次。

PBMC的提取方法： 利用Ficoll将全血分层，之后进行梯度离心， 血液就会分离成一层血浆，然后是一层PBMCs和一层多形核细胞（polymorphonuclear ），如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，和底层红细胞。

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