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1. 简述主要免疫细胞分离方法和分离原理?

1、简述主要免疫细胞分离方法和分离原理?

用毛细管伸至单个核细胞层中（位于细胞分离液与血浆的界面上），沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。

用毛细管伸至单个核细胞层中（位于细胞分离液与血浆的界面上），沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks 液洗两次，每次2000r/min 离心10min，最后用RPMI l640 培养液将细胞配成2106/m1 的细胞悬液备用。

机械法：利用物理外力，如切、割、压、挤、拉、撕、旋等方法，将细胞分离开。优点：操作简单，不使用有毒和致癌物质。缺点：对于细胞脆弱的情况，会造成细胞损伤。

⑵CD8 细胞分离：用Tris 缓冲液稀释羊抗鼠IgG（浓度为10μg/m1）包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS 洗净。

PBMC分离方法的原理是基于血液成分不同的密度，通过在双重密度梯度中离心，利用较低密度部分的小分子浮力将红细胞沉淀，从而获得纯化的单克隆T细胞。

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