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1. 原代肝细胞中分离死细胞和活细胞

1、原代肝细胞中分离死细胞和活细胞

如果血细胞去的非常干净，可以不用percoll分离 3，用低速离心（50g 2 min），死细胞在上层。 台盼蓝检测后基本95%以上活性。我分离的通常在99%以上活性。成鼠肝细胞元代培养很难增值，但是维持1个月没问题。

肝细胞分离，有两个问题要注意的，就是一定尽量要快，时间长了影响细胞活力；另一个就是操作最好在冰上进行，还有大鼠要小点的，150-200g就可以了。消化应的问题，还是自己摸索为好，如果觉得多了可以试着减少用量吧。

稀释法。细胞稀释后还能增殖，会越来越多，而细胞碎片相应地会越来越少。自然沉降法。

师：可以。生：也就是说死细胞不发生质壁分离？师： 只有活的细胞能质壁分离。死细胞不能。生：蛋白质的性质决定细胞膜的选择性，与半透性无关吧。半透性只与脂双层的结构有关吧 师：半透性就是有孔的大小决定的。

第6页 区分死细胞和活细胞的方法有 ①、活细胞能发生质壁分离而死细胞则不能。②进行培养，活细胞能繁殖，死细胞则不能，光镜下观察有多个细胞。③、进行染色，死活细胞呈现不同的结果④、直接观察细胞结构。

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