脾细胞的分离需要无菌吗-分离脾脏淋巴细胞
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1、如何保证分离小鼠脾细胞过程中无微生物污染呢
实验室环境准备:确保实验室环境干净整洁,定期进行消毒和清洁工作,保持无尘状态。这样可以减少空气中的微生物数量,降低污染的风险。实验器材准备:使用无菌器材和试剂,离心管、移液器、培养皿等,避免微生物的污染。
小鼠脾脏淋巴细胞在体外培养时是贴壁生长的。在体外培养时,需要将脾脏淋巴细胞悬液离心,去除组织碎片和杂质,然后将淋巴细胞重新悬浮在培养液中。在培养过程中,淋巴细胞会贴壁生长并增殖。
实验材料要新鲜,从活体分离材料后要低温保存,并尽快进行细胞分离实验。无菌操作。操作时用的培养液,可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。用酶法分离细胞时,注意酶液的浓度和控制消化时间。
在进行脾细胞的分离纯化时,先加不完全培养基可以去除多余的非细胞成分,如浮游细胞和死亡细胞等。这样可以减少对细胞的不利影响和混杂污染,保证细胞的健康性和纯度。
脾细胞制备: 1.引颈处死小鼠,用酒精消毒表体。2.无菌条件下取出脾脏,剃除结缔组织和脂肪,用 5ml 无血清培养液冲洗一次。3.把脾脏置于已消毒的 90~100 目不锈钢网或尼龙纱网中。
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