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1. 淋巴细胞分离及活性检测实验中有一步是将分离液用PBS稀释一倍,这是为什 ...

1、淋巴细胞分离及活性检测实验中有一步是将分离液用PBS稀释一倍,这是为什 ...

PBS缓冲液是由磷酸盐缓冲剂和盐水组成的。磷酸盐缓冲剂可调节溶液的pH值，使其保持在4左右，以适应大多数实验条件。PBS缓冲液可用于细胞寿命研究、细胞分离、免疫印迹、蛋白质结构等各种实验。

用PBS或细胞培养液稀释100%Percoll而获得所需密度的Percoll分离液用于相应细胞的分离。若分离淋巴细胞应使用0777g/ml，配制时用稀释液稀释60%即可。

密度离心法的原理主要根据各类血细胞的比重差异，利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心，使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立区带，从而达到分离的目的。第一层为血浆层。

用吸管吸取稀释血液沿试管壁缓缓加到含有2ml淋巴细胞分离液的试管中（血液：Hanks液：淋巴细胞分离液的比例为1：1：1），沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上，并与分离液形成明显的界面。

　离心后可看见管内分为三层，上层为血浆和PBS，下层主要为红细胞和粒细胞，中层为淋巴细胞分离液。在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带（如下图），单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。

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