亚细胞分离试验为什么低温,设计亚细胞组分分离实验
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1、亚细胞 分离 试验为什么在低温下进行
为了抑制核酸酶的活性。高温会使没有及时提取的细泡组织遭到破坏。亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位。例如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。
因为细胞分级分离是运用差速离心的方法,如果研磨太慢,所要分离的细胞甩不出来,无法分离出来,如果分离时间太长,所有的细胞都甩出来了,分离效果降低,因此要迅速分离。
然后在3000 r/min的条件下离心5min,即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。分离过程最好在0~4℃的条件下进行;如果在室温下,要迅速分离和观察。
匀浆(homogenization)低温条件下,将组织放在匀浆器中,加入等渗匀浆介质(即0.25mol/l蔗糖一0.003mol/l氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。分级分离(fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。
球形红细胞因其面积与体积的比例显著缩小,导致变形性能减低,当其通过脾窦微循环时,就不易或不能通过直径比它小很多的脾窦微循环,而被阻留在脾脏内,被巨噬细胞吞噬破坏。
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