细胞碎片和胞内蛋白的分离-细胞蛋白分离的区别
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1、细胞破碎后,用缓冲液提取蛋白质,用什么方法能得到蛋
所用样品放在冰盒中,因为超声破碎会发大量的热,如果温度过高会使蛋白变性,设置功率,超4秒,停8秒,看你量的决定超的循环数,一般100次足够了。要提蛋白的话不能说是用什么过滤,而是离心。
加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA结合的组蛋白。将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。
蛋白质在用盐析沉淀分离后,需要将蛋白质中的盐除去,常用的办法是透析,即把蛋白质溶液装入秀析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液进行透析,并不断的更换缓冲液,因透析所需时间较长,所以最好在低温中进行。
破碎细菌细胞壁的常用方法有超声波破碎,与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。组织和细胞破碎后,选择适当的缓冲液把所要的蛋白提取出来。细胞碎片等不溶物用离心或过滤的方法除去。
分离细胞膜蛋白的方法:1 冰上刮下细胞后将细胞溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液A中,于室温与液氮罐中反复冻融2次。2 5000转4度离心,驱除核及未裂解的细胞。3 取上清12000转4度离心10分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液B中。
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