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1. 如何处理ficoll分离PBMC细胞时总会带一些红细胞

1、如何处理ficoll分离PBMC细胞时总会带一些红细胞

ficoll要在室温平衡；可用等体积PBS稀释血液，降低粘度；ficoll的量不能太少，1/3是个不错的选择，效果不佳则提高ficoll的量；操作手法要温柔；离心时间30‘；保证所使用的试剂合格。

离心后管内分为三层，上层为皿浆和Hank‘s液，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带，单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。

PBMC的提取方法： 利用Ficoll将全血分层，之后进行梯度离心， 血液就会分离成一层血浆，然后是一层PBMCs和一层多形核细胞（polymorphonuclear ），如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，和底层红细胞。

标准方法：Ficoll-泛影钠（Ficoll-Hypaque）密度梯度及红细胞裂解法1）取一50ml聚乙烯管，无菌采集人外周静脉血，加4ml8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min，离心， 室温。

方法：　在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。　取肝素抗凝静脉血与等量Hank；s液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。

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