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1. 怎样配制percoll细胞分离液

1、怎样配制percoll细胞分离液

%percoll配制：30%的percoll原液 10%的5%的NaCl（10×的NaCl，注意不是等渗的NaCl） 60%的双蒸水。

具体步骤为：用密度为085g/ml和075g/ml的Percoll细胞分离液在离心管中制成密度梯度，将7ml外周血用生理盐水等倍稀释后缓慢加入。4℃下以3000r/min离心30min，收集中层分离界面细胞，以生理盐水洗涤后，4℃保存备用。

在一15ml离心管中依次加入2ml42%、2ml51%Percoll（均为用PPP新鲜配制）、2~3ml细胞悬液，275gX10min。

用毛细管伸至单个核细胞层中（位于细胞分离液与血浆的界面上），沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。

你是做免疫荧光单细胞标本的制备？淋巴细胞分离液的比重就是077不需要稀释，在一定离心力的作用下，比重大于淋巴细胞的红细胞及多核细胞等沉淀于分离液的底层，而淋巴细胞留在分离液的上界面。

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