外周血多形核细胞分离-外周血多形核细胞分离原理
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1、pbmc分离方法及原理
PBMC分离方法是一种生物技术,它可以将多种血液成分(如红细胞、血小板和淋巴细胞)分离出来,从而获得血液中纯的单克隆T细胞。
外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖-泛影葡胺)密度梯度离心法。 扩展资料 基本原理:外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞,其比重为070左右,而红细胞和多核白细胞的比重超过080。
在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 取肝素抗凝静脉皿与等量Hank‘s液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。
过滤器内的细胞不能够很有效的洗涤出来(这个我去医院问过,很难拆除);洗涤出来的细胞在挤压的过程中,很容易破碎(我之前为了提高得率,会经常用空气吹打,在分离后会存在很多细胞碎片)。
PBMC的提取方法: 利用Ficoll将全血分层,之后进行梯度离心, 血液就会分离成一层血浆,然后是一层PBMCs和一层多形核细胞(polymorphonuclear ),如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞,和底层红细胞。
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