分离小鼠B淋巴细胞-分离小鼠淋巴细胞有哪几种方法

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于分离小鼠B淋巴细胞的问题，于是小编就整理了5个相关介绍分离小鼠B淋巴细胞的解答，让我们一起看看吧。

我正在做大鼠脾的B细胞分选，提供点参考：脾脏处理是可以不要理会包膜，剪3－5毫米就可以了。你没说过滤之前用胰酶消化没有，应该消化，消化完后用含有胎牛血清的培养基中止。然后过滤，这样得到的淋巴细胞可能会多些。

小鼠脾脏淋巴细胞在体外培养时是贴壁生长的。在体外培养时，需要将脾脏淋巴细胞悬液离心，去除组织碎片和杂质，然后将淋巴细胞重新悬浮在培养液中。在培养过程中，淋巴细胞会贴壁生长并增殖。

便宜的方法是ficoll密度梯度离心，将脾脏匀浆成单细胞后分离，但不太纯，包含少量粒细胞，还有单核细胞，大部分是淋巴细胞。

首先制备脾脏组织单细胞悬液，制备方法详见“脾脏组织单细胞悬液制备技术”。取一支 15ml 离心管，加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。

这是个简单实验，得到细胞量很大，能见到明显的淡红色，基本不会出现问题。观察不到细胞可能是液体加的多，离心弃上清即可。保证用的液体是缓冲液，Hanks液和PBS都可以。氯化钠会胀破细胞。别的我也想不到了。

提前一天注射，24h后，清除95%的巨噬细胞。静脉，腹腔，气管，鼻腔都可以给药。

第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。

它就会浮于血液上方，离心的时候不能和血液充分混匀，影响分离效果；先加淋巴分离液则不一样，这样离心的时候二者一个向下一个向上发生相对运动，和占比较大的红细胞彻底交换位置，使得混匀非常充分，从而保证分裂效果。

淋巴细胞分离液大概是由聚蔗糖、泛影酸葡甲胺、氢氧化钠等配制成水溶液，经灭菌而成。相对密度13。用于分离全血中淋巴细胞。

B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝（胚胎小鼠14天）的造血细胞岛中，此后B淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。骨髓瘤细胞从实验动物的骨髓中提取。

用吸管吸取稀释血液沿试管壁缓缓加到含有2ml淋巴细胞分离液的试管中（血液：Hanks液：淋巴细胞分离液的比例为1：1：1），沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上，并与分离液形成明显的界面。

小鼠B细胞： CD45R/B220（相应mAb为RA3- 6B2）是小鼠全B细胞最常用标记，但特异性的标记和人相同，仍为CD1小鼠T细胞：小鼠重要的T细胞标记有Thy- 1（CD90）和成熟T细胞标记CD3e。

本实验是采用密度梯度离心法分离单个核细胞（mononuclear cell）。单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。

小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域，所以富含各类免疫细胞。免疫细胞的分离：采用红细胞裂解法，是根据细胞对渗透压变化的敏感度。

　中性粒细胞的分离　新鲜的外周血或骨髓，用肝素抗凝，经淋巴细胞分离液分离，去除淋巴细胞和单个核细胞，用右旋糖酐（dextran，分子量=7～11 万）沉降和低渗法去除红细胞，得到纯净的中性粒细胞。

B淋巴细胞起源于骨髓造血干细胞，最初的B淋巴细胞是没有活性的，当它受到刺激后才起作用。也就说：最初产生的B淋巴细胞没有特异性，所以是百万多种B淋巴细胞，只有受到特定的抗原刺激后才产生特定的B淋巴细胞。

单克隆抗体能与其相应的抗原特异性结合，因而能够从复杂系统中识别出单个成分。只要得到针对某一成分的单克隆抗体，利用它作为配体，固定在层析柱上，通过亲合层析，即可从复杂的混和物中分离、纯化这一特定成分。

到此，以上就是小编对于分离小鼠B淋巴细胞的问题就介绍到这了，希望介绍关于分离小鼠B淋巴细胞的5点解答对大家有用。

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