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ficoll无法分离红细胞,分离红细胞离心速度不能过高和时间过长的原因是

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  1. FICOLL提取单个核细胞,总混有较多红细胞,怎么办

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ficoll要在室温平衡;可用等体积PBS稀释血液,降低粘度;ficoll的量不能太少,1/3是个不错的选择,效果不佳则提高ficoll的量;操作手法要温柔;离心时间30‘;保证所使用的试剂合格。

红细胞裂解液是专门设计来破坏红细胞的,它能够有效地去除红细胞,同时不损害有核细胞。 使用裂解液裂解红细胞是一种简单且有效的方法,特别适用于哺乳动物外周血中红细胞的去除。

根据细胞密度的不同进行分离。单个核细胞的体积、形状和比重与其他细胞不同,红细胞和多核白细胞比重较大,为 092 左右,淋巴细胞和单个核细胞比重为 075 左右。

血浆和PBS 红细胞和粒细胞  去除部分上层液体(用移液管吸取,不可倾倒),余下约1mL,用移液器插到云雾层,吸取单个核细胞。置入另一15mL离心管中,加入5倍以上体积的PBS,离心300g×10分钟,洗涤细胞两次。

目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。方法: 在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。

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