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细胞分离与培养技术的关系-细胞分离与培养的程序有哪些

细胞分离与培养技术的关系-细胞分离与培养的程序有哪些

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  1. 大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

1、大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

动物选择:优先选择4-6周龄大鼠,因其细胞活性高,易于增殖。培养基:选择α-MEM培养基,加入10% FBS和0.01%双抗以抑制污染。操作技巧:选择一次性塑料细胞培养瓶,保持无菌操作。

严谨的全骨髓提取首先,通过颈椎脱臼法进行全骨髓提取,对股骨和胫骨进行消毒,然后冲洗并分离骨髓。随后,通过离心和稀释,得到富含细胞的悬液,这是后续分离的第一步。

目前常用的分离MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法,全骨髓法即根据干细胞在低血清培养基中有贴壁优势特性,定期换液除去不贴壁细胞,从而达到纯化及扩增MSC的目的。

在原代培养的时候,间充质干细胞常常是克隆性增殖,也就是先形成一个小的细胞团,然后围绕这个细胞团逐步向外增殖,而且是边增殖边向外游走,慢慢占满一片领域。

DMEM-F12是适于各类干细胞培养的基础培养基,按不同目的还需要你补加其它东西。看到丁香园里的很多人都是那这个养BMSC的,应该没问题。但也有人说DMEM/F12容易导致细胞分化,所以个人建议最好使用低糖培养基。

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