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1. 如何理解样品制备过程中蛋白质分离,提取和纯化?

1、如何理解样品制备过程中蛋白质分离,提取和纯化?

分离：将混合物中待用的成分与其他成分分离开来，是初步的提纯。如：蒸馏工业酒精时有一个馏分就是酒精和少量水的混合物。纯化：对分离提纯过的物质进一步提纯，获得纯净的物质。如：分离到的酒精和少量水的混合物用氧化钙处理后再蒸馏得到无水乙醇；蛋白质结晶等等。

透析：将待提纯蛋白质放在透析袋中放在蒸馏水中进行。原理：利用蛋白质分子不能透过半透膜的性质，使蛋白质和其他小分子物质如无机盐、单糖、水等分开。超过滤：利用压力和离心力，强行使其他小分子和水通过半透膜，而蛋白质留在膜上。凝胶过滤层析。

蛋白质的分离，是指将蛋白质从生物体中提取出来的技术手段。是不同种类物质的区分，如区分核酸、多糖和蛋白质。蛋白质的纯化是从总蛋白中提取出单一种类的蛋白质。如从猪肝组织总蛋白中分离ATP合酶的操作。纯化步骤一般比分离要复杂和精细的多。色谱是一种纯化手段。

纯化过程分为三个阶段：前处理以保持活性，粗略分离以去除杂质，再到精细纯化如层析、电泳等，结晶则验证其天然状态的完整性。蛋白质提取策略多种多样，从水溶液开始，比如利用稀盐溶液在低温下操作，关键在于控制pH值和盐浓度，以保持蛋白质的稳定性。

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