如何分离纯化NK细胞(nk细胞分离 纯化 培养)
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1、免疫细胞分类及分离方法
免疫细胞淋巴细胞的分离 取肝素抗凝血1ml加Hanks 液1m1 稀释后,沿管壁徐徐滴流叠加盛有2ml淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合,然后2000r/min 水平离心20min,管内分为4 层,自上而下依次为血浆,单个核细胞,颗粒白细胞、红细胞(图21)。
免疫细胞分离技术\x0d\x0a淋巴细胞的分离\x0d\x0a取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后,沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合,然后2000r/min水平离心20min,管内分为4层,自上而下依次为血浆,单个核细胞,颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。
⑵CD8 细胞分离:用Tris 缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg/m1)包被一平皿表面,然后放置4℃过夜,没有包被上的抗体用PBS 洗净。
免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法:阳性分离法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞 阴性分离法-磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞 一般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用行更多。
B细胞一般分为B-1细胞亚群和B-2细胞亚群。B-1细胞主要识别胸腺非依赖性抗原(TI抗原),即非蛋白质类抗原如脂类、多糖抗原等,这些抗原可直接激活B细胞,无需Th细胞的辅助。B-2细胞介导对胸腺依赖性抗原(TD抗原)即蛋白质抗原的免疫应且须有Th细胞的辅助。
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