分离细胞器上清液(细胞分离液原理)
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1、差速离心法分离细胞器的溶液的条件
差速离心法的溶液条件如下:差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心速度较低,让较大的颗粒沉降到管底,小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀,改用较高的离心速度离心悬浮液,将较小的颗粒沉降,以此类推,达到分离不同大小颗粒的目的。
差速离心植物细胞时溶液浓度要看具体数据。一般分离细胞器最常见的方法是将组织制成匀浆,匀浆低温条件下,将组织放在匀浆器中,加入等渗匀浆介质,为0.25mol/L的蔗糖溶液。差速离心法是分离各种细胞器的常用方法,主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。
可一次获得较纯颗粒;②适应范围广,能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形,能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。此法的缺点是:①离心时间较长;②需要制备惰性梯度介质溶液;③操作严格,不易掌握。
其中D}为溶液密度,f为摩擦系数,dr/dt为沉降速度(单位时间内旋转半径的改变)。基本原理 在一定条件下,可有 :F=F’ F’’V.D. ω2r =V.D’ω2r f. dr/dt dr/dt =Vω2r (D-D’)/f (4)式(4)表明,沉降速度与被离心物质的体积、密度差呈正比,与f成反比。
目前超速离心机的最高转速可达100Kr/min,离心力超过500Kg。差速离心差速离心(differential centrifugation)是指在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心,用于分离不同大小的细胞和细胞器(图1)。
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