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1. 如何从小鼠脾脏中分离T/B淋巴细胞

1、如何从小鼠脾脏中分离T/B淋巴细胞

我正在做大鼠脾的B细胞分选，提供点参考：脾脏处理是可以不要理会包膜，剪3－5毫米就可以了。你没说过滤之前用胰酶消化没有，应该消化，消化完后用含有胎牛血清的培养基中止。然后过滤，这样得到的淋巴细胞可能会多些。贴壁细胞不是淋巴细胞。悬浮细胞才是淋巴细胞，体积很小，正常的是小而园亮。

便宜的方法是ficoll密度梯度离心，将脾脏匀浆成单细胞后分离，但不太纯，包含少量粒细胞，还有单核细胞，大部分是淋巴细胞。贵的方法采用磁珠分离，美天旎和Stemcell公司提供了不同的方案，前者需要特殊的柱子、抗体、和分离架，价格比较贵。后者也需要一个特殊的磁力柱和抗体，但操作简单。

首先制备脾脏组织单细胞悬液，制备方法详见“脾脏组织单细胞悬液制备技术”。取一支 15ml 离心管，加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。用吸管小心吸取脾脏组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min。

脾脏细胞悬液在进行淋巴细胞计数之前最好先去除红细胞（RBC） 。胸腺和淋巴细胞悬液则不必去除红细胞。脾脏细胞的亚群分离也需先去除红细胞。附加材料 ACK 裂解缓冲液 步骤 每个脾脏用约5ml 裂解缓冲液悬浮脾脏细胞；一个12ml 试管可用于裂解一个或两个脾脏，也可以用50ml 离心管裂解更多的脾脏。

T淋巴细胞（又名T细胞）及其表面受体和B淋巴细胞（又名B细胞）都起源于骨髓中的造血干细胞；T细胞随血循环到胸腺，在胸腺激素等的作用下成熟， B细胞则到脾脏或腔上囊发育成熟。然后再随血循环到周围淋巴器官，在各自既定的区域定居、繁殖（主要为脾脏），整装待发。

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