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1. 请教:小鼠单个核细胞分离及Ficoll

1、请教:小鼠单个核细胞分离及Ficoll

目的是使其彼此分离。将小鼠脾脏中各种不同比重的细胞通过离心沉降而达到使其彼此分离的目的。根据物理学颗粒沉降原理，不同密度的颗粒在其沉降运动中可因其比重的差别而处于不同的分布位置。利用此原理可设计一定比重的液体界面。

便宜的方法是ficoll密度梯度离心，将脾脏匀浆成单细胞后分离，但不太纯，包含少量粒细胞，还有单核细胞，大部分是淋巴细胞。贵的方法采用磁珠分离，美天旎和Stemcell公司提供了不同的方案，前者需要特殊的柱子、抗体、和分离架，价格比较贵。后者也需要一个特殊的磁力柱和抗体，但操作简单。

ficoll要在室温平衡；可用等体积PBS稀释血液，降低粘度；ficoll的量不能太少，1/3是个不错的选择，效果不佳则提高ficoll的量；操作手法要温柔；离心时间30‘；保证所使用的试剂合格。

最好是用淋巴细胞分离液把单个核细胞分离出来，然后-80℃保存。外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）的分离是免疫学研究中的一项基本技术。

Ficoll和Percoll的区别：价格区别：percoll的价格是ficoll两到三倍。原理区别：percoll是利用percoll液经高速离心后形成一个连续密度梯度的原理，将密度不等的细胞分离纯化。而ficoll主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法。

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