细胞和组织的分离,细胞组分的分离方法及原理
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1、如何从组织中分离出单个活细胞
动物组织中细胞间可通过纤维蛋白维持细胞的位置,故可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。分离植物组织中的细胞可用解离液(质量分数为15%的盐酸:体积分数为95%的酒精=1:1),解离液可以破坏植物组织的细胞间的联系。
愈伤组织是植物组织培养过程中出现的,要想使其变为单细胞,关键是去细胞壁。细胞壁的成份是纤维素和果胶,故需使用纤维素酶和果胶酶。
传统的细胞分离方法对于单细胞制备就足够了,但是必须优化将原生组织(primary tissue)酶解为单个活细胞的效率,以避免失去比较脆弱或容易死亡的细胞群体。细胞外基质的组成和组织的类型可能会影响消化酶的选择以及消化的温度和持续时间,还应根据原始组织来选择和优化酶解方法[15]。
×107cells/mL。细胞分离就是通过物理、生物、化学的方法,将生物组织分离为单细胞分散系的过程。一般动物组织经培养,其细胞会延培养基表面平铺生长,自行达到细胞分离的目的。还可用胶原酶处理分离。而植物组织培养后会形成愈伤组织,要用化学方法才能获得单个细胞(一般用纤维素酶)。
愈伤组织(callus)原指植物体的局部受到创伤刺激后,在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成,可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。果胶酶去除愈伤组织的细胞壁后,其内部的薄壁细胞不再受细胞壁的约束,能够大量增殖。
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