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1. 人淋巴细胞分离液操作protocol

1、人淋巴细胞分离液操作protocol

洗涤步骤为去除血小板和血浆蛋白，进行以下步骤：吸取淋巴细胞层至干净离心管，减少杂质的混入。加入至少3倍体积的盐缓冲液（6ml）以稀释。用巴斯德吸管轻轻吹打，使细胞层与盐缓冲液充分混合，然后18-20°C，60-100g离心10分钟。

取血后，静置1-2小时，置于离心机内以3000P/m离心15分钟，用移吸管吸出分离的血清（上层乳黄色的上清液），置于4℃冰箱保存。测定时移至室温下30分钟解冻。剩下的应该是血浆了。淋巴细胞不可能从剩下的血浆分离了。

　在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。　取肝素抗凝静脉血与等量Hank；s液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。　离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank；s液，下层主要为红细胞和粒细胞。

无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。 用吸管吸取稀释血液沿试管壁缓缓加到含有2ml淋巴细胞分离液的试管中（血液：Hanks液：淋巴细胞分离液的比例为1：1：1），沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上，并与分离液形成明显的界面。

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