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单个核细胞分离的回收率,单个核细胞分离计数

单个核细胞分离的回收率,单个核细胞分离计数

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于单个核细胞分离的回收率的问题,于是小编就整理了1个相关介绍单个核细胞分离的回收率的解答,让我们一起看看吧。

  1. 细胞生物学:如何从血液中分离b淋巴细胞?

1、细胞生物学:如何从血液中分离b淋巴细胞?

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物,然后用CD4 T细胞的单抗,免疫磁珠法分离;或者利用流式细胞仪进行分选。如果精确的话得用专门仪器了,要后续培养干扰小建议磁珠分,这个操作比较简单,对设备要求不高,如果是要纯度高推荐流式细胞术了,这个需要有分选的仪器,一般分析仪器只能分析比例。

方法:在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。取肝素抗凝静脉血与等量Hank;s液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。离心后管内分为三层,上层为血浆和Hank;s液,下层主要为红细胞和粒细胞。

外周血中除红细胞外,还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等,通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种:自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分 离法、Ficoll分离法。

一般都是先得到全血,然后染色,一般是CD45,CD3加CD20三种抗体。染色后裂解红细胞。T细胞是CD45和CD3双阳性的,B细胞是CD45和CD20双阳性。上机设置分选门后分选即可。

分离方法说明:取新鲜抗凝血1ml,与生理盐水1:1 混匀后,小心加于2ml细胞分离液之液面上;以400g(约1500转/分,半径15cm水平转子)离心20分钟,此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层:为血浆层。第二层:为环状乳白色淋巴细胞层。第三层:为透明分离液层。第四层:为红细胞层。

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