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1. 大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

1、大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

动物选择：优先选择4-6周龄大鼠，因其细胞活性高，易于增殖。培养基：选择α-MEM培养基，加入10% FBS和0.01%双抗以抑制污染。操作技巧：选择一次性塑料细胞培养瓶，保持无菌操作。换液策略：频繁换液去除杂细胞，但需防止细胞损失，初次换液后补加培养液观察8小时。

严谨的全骨髓提取首先，通过颈椎脱臼法进行全骨髓提取，对股骨和胫骨进行消毒，然后冲洗并分离骨髓。随后，通过离心和稀释，得到富含细胞的悬液，这是后续分离的第一步。 培养与观察细胞被计数后，置于恒温培养箱中，10% CO2环境中培养，密切关注细胞状态，适时更换培养基以维持最佳生长环境。

但也有人说DMEM/F12容易导致细胞分化，所以个人建议最好使用低糖培养基。

多向分化潜能鉴定 MSC具有在体外分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝细胞等定向分化的能力，所以鉴定MSC的多向分化潜能也是重要的鉴定方法之一。MSC成骨诱导分化最常用的染色方法是茜素红染色法，成脂诱导分化最常用的染色方法是油红O染色法，而成软骨诱导分化最常用的方法是阿利辛蓝染色、悬浮培养。

对于胰腺的修复 ，目前已证明间充质干细胞具有分化为 β-胰岛细胞的潜力，在体外大鼠骨髓间充质干细胞可分化为功能性胰岛样细胞[4]。这一发现代表了间充质干细胞治疗一系列胰腺相关疾病的潜在用途，包括：糖尿病；胰腺癌；囊性纤维化引起的胰腺损伤；以及先天性胰腺畸形等。

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