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1. 离心沉淀淋巴细胞分离培养需要多久

1、离心沉淀淋巴细胞分离培养需要多久

．再用同样洗涤液洗涤细胞2次，每次离心500×g 10分钟，洗去残留的淋巴细胞分离液。用1%台盼蓝染色检测细胞活力（应；95%）并计数细胞。再用含10%小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。

第一层为血浆层（含血小板）。第二层为环状乳白色淋巴细胞（单核/单个核细胞层）。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层（含大量中性粒细胞）。收集细胞放入含注射用生理盐水4-5毫升的试管中，充分混匀后，以500g，离心20分钟。沉淀经反复洗2次即得所需细胞。

收集第二层细胞放入含生理盐水4-5ml的试管中，充分混匀后，以400g（约1500转/分）离心20分钟。沉淀经2次洗涤后即得所需淋巴细胞。注： 提取率约为80%。注意事项：A．本分离液要求血液为新鲜抗凝血，避免冷冻和冷藏；在收集血液和分离过程中，应注意无菌操作，避免微生物污染。

取肠系膜淋巴结，治愈含2mlPBS（ph2~4）中（5cm平皿） 去除脂肪等非淋巴细胞，铜网机械研碎剩余组织，2ml，PBS冲洗铜网。 将制备的细胞悬液转移到10ml离心管中，2000R/M，5min，离心后弃上清液，注意：弃上清时适量留下部分上清，不要抽到沉淀上层的淋巴细胞。

800转，离心10分钟，（洗掉红细胞） 重复两至三次 加入PBS液至50ml，计数：？个细胞 离心后铺板，1X1076孔板培养液，共铺20板。

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