细胞质细胞膜蛋白分离-细胞蛋白分离现象
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1、如何将膜上的蛋白从细胞膜上分离出来
蛋白质在用盐析沉淀分离后,需要将蛋白质中的盐除去,常用的办法是透析,即把蛋白质溶液装入秀析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液进行透析,并不断的更换缓冲液,因透析所需时间较长,所以最好在低温中进行。此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐,所用的时间就比较短。
预冷离心管柱和接收管。收集细胞或组织,清洗后用Buffer A重悬,低温孵育并加入离心管柱。根据细胞或组织类型调整后续操作,如研磨、洗涤和离心。进行离心分离,细胞核和质膜蛋白得以分离。若需提取质膜,重复离心和洗涤步骤以提高产量。质膜蛋白最终被分离并保存,用于后续研究。
Triton X100在蛋白提取过程中,起到将膜蛋白从细胞膜上解离下来的作用,TritonX100没有维持酶活的作用。TritonX100是一种表面活性剂,或称界面活性剂,具有疏水端和亲水端。由于TritonX100有疏水结构域,用此试剂可以将膜蛋白从细胞膜上解离下来,从而达到提取膜蛋白的目的。
大分子物质是胞吞胞吐的,例如蛋白质所有的分泌蛋白都是胞吐出细胞的 白细胞吞噬病毒时是胞吞, 而小分子如甘油,水,各种离子都是跨膜运输。
先分离膜,然后提取;如选用冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法使得细胞破碎,然后通过剃度离心得到含有膜蛋白的粗组分。(例如:michael11液氮研磨组织,加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂。差速离心。蔗糖密度梯度离心。收集37%与41%间的成分,即为质膜部分。
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