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分离原代细胞为什么裂解了,原代细胞分离纯化的实验结果

分离原代细胞为什么裂解了,原代细胞分离纯化的实验结果

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  1. rna的分离与提纯为什么裂解两次

1、rna的分离与提纯为什么裂解两次

一般mRNA分离纯化的原理就是根据mRNA 3’ 末端含有多poly(A)尾巴结构特性设计的。当总RNA流经寡聚(dT)(即oligo(dT)纤维素柱时,在高盐缓冲液作用下,mRNA被特异地吸附在oligo(dT)纤维素柱上,在低盐浓度或蒸馏水中,mRNA可被洗下,经过两次oligo(dT)纤维素柱,即可得到较纯的mRNA。

Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。

高温灭菌两次可以破坏RNA酶的复性过程.虽然RNA酶极易复性,但两次连续的高温会打乱它的复性历程,从而使RNA酶失活。DEPC是RNA酶的非竞争性抑制剂。DEPC可以与RNA酶的活性中心的组氨酸咪脞环上的N结合,从而使RNA酶失活。因为DEPC能与RNA的N结合,从而修饰RNA,所以,必须将DEPC最终除去。

病毒正常粉子是rna链要进行两次碱基互补配对才能得到子代的rna的原因:这里的RNA是指tRNA,在tRNA中有一些折叠的区段,这些区段中含有氢键。RNA复制中A-U,U-A,C-G,G-C;(模板是RNA,产物也是RNA)。DNA复制中A-T,T-A,C-G,G-C;(模板是DNA,产物也是DNA)。

TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIzol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,因此对纯化DNA及标准化RNA的生产十分有用。

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