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在细胞分离中细胞密度变化-怎样测定分离细胞的密度及其存活率

在细胞分离中细胞密度变化-怎样测定分离细胞的密度及其存活率

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  1. ficoll密度梯度离心法

1、ficoll密度梯度离心法

Ficoll分离法是一种单次差速密度梯度离心的分离法;Percoll分离法为连续密度梯度离心分离法。

Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞,是一种单次差速密度梯度离心的分离法。

密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是:常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是077±0.001的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,犌W水性高,平均分子量为400,000,当密度为2g/ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。

密度梯度离心法分离PBMC  在15mL离心管中加入5mL淋巴细胞分离液Ficoll。 取5mL抗凝静脉血与5mL无菌PBS按照1:1充分混匀,用移液管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,动作一定要轻,注意保持清楚的界面。外周血,PBS,淋巴细胞分离液最终体积比为1:1:1。 水平离心400g×30分钟。

标准方法:Ficoll-泛影钠(Ficoll-Hypaque)密度梯度及红细胞裂解法1)取一50ml聚乙烯管,无菌采集人外周静脉血,加4ml8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min,离心, 室温。2)吸出富含血小板的上清,2500gX15min,制备无血小板血浆(platelet-poor Plasma, PPP)。

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