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1. 外泌体提取策略

1、外泌体提取策略

外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是目前外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块， 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 。

将上清液转移至新管中，以避免离心过程中产生的干扰物。将上清液在超速离心机中离心 2 h（最大转速 11 万 rcf），以沉淀外泌体。将过滤液和上清液完全去除，并将外泌体沉淀用 PBS 缓冲液重悬，即可获得外泌体样品。

贝克曼差速超速离心法（DUC）简单而高效，依靠多轮离心选择性清除污染物并获得高质量EV沉淀物，尤其是外泌体。3DUC的主要优点是手动操作时间短、通量高、产率高、平均样本成本低。此外，DUC广泛适用于从小样本量到升级别的大批量样品的EV纯化流程。通常使用蔗糖和碘克沙醇等密度梯度液来获得高纯度EV样品。

超速离心（差速离心）法是目前最常用的外泌体提取方法 ，即采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎。本人近期发表的论文中最后也是采用了这种方法。

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