细胞中分离出溶酶体,溶酶体能分解细胞器吗
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1、从细胞中分离出溶酶体的方法是什么
现在认为溶酶体与卵的受精、形态发生、衰老及某些疾病有关,其分离纯化方法可用分级离心,再用等密度蔗糖梯度离心纯化,也可用Triton-WR1339处理大鼠,2~4h后杀死,毒性低,比重小的Triton-WR1339集中在溶酶体上,使溶酶体比重便轻,易于分离。操作方法:所有操作需在4℃下进行。
速度沉降速度沉降(velocity sedimentation)主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种降方法所采用的介质密度较低,介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。
细胞器的分离,一般采用差速离心法,此法是利用细胞各组分质量大小不同,在离心管不同区域沉降的原理,分离出所需组分,分离得到的细胞器,其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。分离各种细胞器的方法分离各种细胞器常用的方法是差速离心法。
在实际操作中,差速离心的顺序是有序的:首先分离出的是核,随后是线粒体,接着是溶酶体与过氧化物酶体,紧接着是内质网和高基体,最后则是核糖体。这样的顺序确保了各细胞器的初步分离,为后续可能的密度梯度离心奠定了基础。
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