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1. 从细胞培养液中怎么分离蛋白质?

1、从细胞培养液中怎么分离蛋白质?

把细胞离心下来后，用TCA或（NH4）2SO4沉淀下来就可以啦。 再把沉淀溶解到适当的buffer里就可以做后面的实验。

裂解30 min后，即可用移液器将裂解液移至5ml离心管中，然后在4℃下12000rpm离心5min，取上清分装于0.5ml离心管中并置于-20℃保存。 （3） 加药物处理的贴壁细胞总蛋白的提取：由于受药物的影响，一些细胞脱落下来，所以除按（一）操作外还应收集培养液中的细胞。

盐析法：盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

蛋白质分离提纯的一般原则 前处理 把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来，保持原来的天然状态，并不丢 失生物活性。常用的方法：匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等。超声波破碎法：当声波达到一定频率时，使液体产生空穴效应使细胞破碎的技术。

蛋白提取时使用蛋白裂解液将细胞裂解，然后离心分为上清液和下层沉淀，如果你说的是这个上清液的话，那么这个上清液是细胞中的可溶性蛋白，一般包括细胞质的蛋白和细胞核的可溶性蛋白，下层沉淀主要是细胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色质之类的东西。

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