本篇文章给大家谈谈原代细胞分离失败怎么办，以及原代细胞离心对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享原代细胞分离失败怎么办的知识，其中也会对原代细胞离心进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 原代肝细胞中分离死细胞和活细胞
2. 如何提高原代细胞培养的成功率?
3. 大鼠原代肝细胞分离,活率一直上不去,求助大神
4. 原代细胞培养常见问题有哪些

1、原代肝细胞中分离死细胞和活细胞

如果血细胞去的非常干净，可以不用percoll分离 3，用低速离心（50g 2 min），死细胞在上层。 台盼蓝检测后基本95%以上活性。我分离的通常在99%以上活性。成鼠肝细胞元代培养很难增值，但是维持1个月没问题。

阻断肝上下腔静脉（位置较深，分离结扎有难度，可用哈巴狗血管夹夹住，亦可用消毒棉签压迫）5，从门静脉内注入D-HANKS，直至肝下下腔静脉插管内流出来的液体中不含或含少量红细胞，肝脏呈米黄色。

肝细胞分离，有两个问题要注意的，就是一定尽量要快，时间长了影响细胞活力；另一个就是操作最好在冰上进行，还有大鼠要小点的，150-200g就可以了。消化应的问题，还是自己摸索为好，如果觉得多了可以试着减少用量吧。

区分活细胞和死细胞可以使用专门的染料，比如胎盘蓝或者PI。死细胞的膜不完整，所以染料会进入细胞，将细胞核中的核酸物质染色，而这些染料进不了活细胞，所以不会着色。

活细胞可以发生质壁分离现象，并在一定条件下发生质壁分离复原现象，而死细胞则不能，这是区别活细胞与死细胞的简便方法之一。

2、如何提高原代细胞培养的成功率?

原代培养最怕染菌，首先一定要做到无菌条件，取下的组织要依次经过酒精，含双抗缓冲液（PBS或D-HANKS），不含双抗缓冲液，漂洗数次。再者就是在剪碎组织时应该是越碎越好，一般要剪20-30分钟。

保证无菌，包括无菌操作，无菌环境.枪头等要及时灭菌，培养瓶，移液管使用一次性的。要传代的时候细胞传代的数量不能太少，否则细胞不容易养活.另外，传代不要过度频繁，即使是肿瘤细胞。

原代培养时初始培养在组织分散和分离细胞时细胞可能会受到严重的损伤。适当增大原代培养接种的细胞密度，给培养的细胞提供更多的类似于在体内时细胞之间的相互作用，会极大提高原代培养的细胞在体外存活率。

器材使用时既要注意用火焰消毒，又要防止烫伤、烫死细胞。经火焰消毒后的吸管一定要用Hanks液冷却。超净台内温度、湿度较大，在夏天工作时台内散热更慢，因此进行细胞悬液混匀、接种时，离火焰要稍微远些。

3、大鼠原代肝细胞分离,活率一直上不去,求助大神

肝细胞分离，有两个问题要注意的，就是一定尽量要快，时间长了影响细胞活力；另一个就是操作最好在冰上进行，还有大鼠要小点的，150-200g就可以了。消化应的问题，还是自己摸索为好，如果觉得多了可以试着减少用量吧。

如果血细胞去的非常干净，可以不用percoll分离 3，用低速离心（50g 2 min），死细胞在上层。 台盼蓝检测后基本95%以上活性。我分离的通常在99%以上活性。成鼠肝细胞元代培养很难增值，但是维持1个月没问题。

阻断肝上下腔静脉（位置较深，分离结扎有难度，可用哈巴狗血管夹夹住，亦可用消毒棉签压迫）5，从门静脉内注入D-HANKS，直至肝下下腔静脉插管内流出来的液体中不含或含少量红细胞，肝脏呈米黄色。

谷康定等用2步灌流法制备大鼠原代肝细胞，经MC-LR处理后，数小时后细胞形态学即发生改变，其灵敏度可达μg/L级。

4、原代细胞培养常见问题有哪些

胰酶消化的程度是细胞培养中的一个关键步骤：消化过度细胞碎片增多，黑渣子增多，细胞会成片脱落，严重影响细胞活性，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失；消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。

细胞膜遇到高温后容易变态。在自然界，既有耐高温的恒温培养箱细胞，也有耐低温的细胞。在极端情况下生长的生物对付极端环境的机制研究在生物进化和农业、环保、发酵工业中意义重大。⑵pH 过酸或过碱可导致细胞死亡。

原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，虽然被分散成单个细胞，但它们之间的互相影响还是存在的，而且这种影响对细胞能否存活是非常重要的。在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。

器材使用时既要注意用火焰消毒，又要防止烫伤、烫死细胞。经火焰消毒后的吸管一定要用Hanks液冷却。超净台内温度、湿度较大，在夏天工作时台内散热更慢，因此进行细胞悬液混匀、接种时，离火焰要稍微远些。

到此，以上就是小编对于原代细胞分离失败怎么办的问题就介绍到这了，希望介绍关于原代细胞分离失败怎么办的4点解答对大家有用。