淋巴细胞分离液常用什么(淋巴细胞分离液要求符合的条件有)
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1、小鼠外周血淋巴细胞分离实验报告
本实验是采用密度梯度离心法分离单个核细胞(mononuclear cell)。单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞(monocyte)。
小鼠脾脏位于上腹部左后侧,体积较大,长条形,属于外周免疫器官。外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域,所以富含各类免疫细胞。免疫细胞的分离:采用红细胞裂解法,是根据细胞对渗透压变化的敏感度。
这是个简单实验,得到细胞量很大,能见到明显的淡红色,基本不会出现问题。观察不到细胞可能是液体加的多,离心弃上清即可。保证用的液体是缓冲液,Hanks液和PBS都可以。氯化钠会胀破细胞。别的我也想不到了。
中性粒细胞的分离 新鲜的外周血或骨髓,用肝素抗凝,经淋巴细胞分离液分离,去除淋巴细胞和单个核细胞,用右旋糖酐(dextran,分子量=7~11 万) 沉降和低渗法去除红细胞,得到纯净的中性粒细胞。
2、密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理
密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是:常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是077±0.001的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。
密度梯度离心法原理 密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度。密度梯度离心是将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
密度梯度离心法:用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同。
3、细胞生物学:如何从血液中分离b淋巴细胞?
无菌抽取静脉血2ml,去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀,加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释,混匀。
先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物,然后用CD4 T细胞的单抗,免疫磁珠法分离;或者利用流式细胞仪进行分选。
PBMC分离方法是一种生物技术,它可以将多种血液成分(如红细胞、血小板和淋巴细胞)分离出来,从而获得血液中纯的单克隆T细胞。
从PBMC中分离淋巴细胞的方法有:(1)贴壁粘附法;(2)吸附柱过滤法;(3)磁铁吸引法;(4)Percoll分离液法。
第一层:为血浆层。第二层:为环状乳白色淋巴细胞层。第三层:为透明分离液层。第四层:为红细胞层。收集第二层细胞放入含生理盐水4-5ml的试管中,充分混匀后,以400g(约1500转/分)离心20分钟。
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