细胞提取液分离酶(提取细胞内的酶)
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于细胞提取液分离酶的问题,于是小编就整理了1个相关介绍细胞提取液分离酶的解答,让我们一起看看吧。
1、如何提取植物叶片细胞液里面的酶?
天然植物的细胞壁由纤维素构成,其中植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内。酶提取法就是利用纤维素酶果胶酶蛋白酶等(主要是纤维素酶),破坏植物的细胞壁,以促使植物有效成分最大限度溶解分离出的一种方法。
首先,破碎植物细胞。然后,根据所需要的酶的结构和溶解性质,选择适当的溶剂提取。为了提高提取率,防止酶变性失 活,在提取过程中要注意控制好温度,pH值等提取条件。第三,离心分离、过滤与膜分离、沉淀分离、层析分离、电泳分离、萃取分离、结晶等。
植物细胞有坚韧的细胞壁,需要强烈的方法去破碎,少量样品可用研钵加石英砂研磨,或用玻璃匀浆器。大量样品则需用电动匀浆器。为减低研磨或匀浆过程中发热,所用器皿和溶液需要预冷,提取液的用量一般为组织的1梍5倍,用量大些有利于提高得率,但工作量大,一般宁可用量小些,将残渣再提取一次。
如果是胞外酶,这就方便多了,只要收集微生物和细胞的培养液进行分离和提纯就可以了。如果酶在细胞内(称胞内酶),则必须研碎细胞,才能把酶提取出来。不论是胞外酶还是胞内酶,都可能会含有一些其他大分子物质,如核酸、蛋白质和淀粉之类的东西。对付核酸,只要在酶溶液中加入核酸酶,就可以去掉核酸。
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