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1. 快问快答12| GAL4系统酵母双杂的原理

1、快问快答12| GAL4系统酵母双杂的原理

原理揭秘 首先，GAL4系统的核心是真核生物中常见的转录激活因子GAL4，其结构独特，分为DNA结合域（BD， DNA-binding domain）和转录激活域（AD， Transcriptional activation domain）。在双杂交实验中，我们将两个待测蛋白分别融合到BD和AD的载体上，如Bait（诱饵）和Prey（猎物）载体。

【答案】：（1）基本原理：真核生物的转录因子大多是由两个结构上分开、功能上独立的结构域组成的。如GAL4的N端1～147氨基酸是DNA结合域（BD），其C端768～881氨基酸是转录激活域（AD）。一般情况下，AD能与GAL4效应基因启动子上游的特定DNA区段（uAS）相结合，AD则推动了转录起始。

酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生物转录因子， 如GALGCN等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域（DNA-binding domain）和转录激活结构域（transcription-activating domain）。

酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GALGCN等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域（DNA-binding domain）和转录激活结构域（transcription-activating domain）。

酵母双杂交系统 真核生物转录调控因子具有组件式结构 （modular） 特征，这些蛋白往往由两个或两个以上相互独立的结构域， 其中DNA结合结构域（ binding domain， BD）和转录激活结构域（ activation domain， AD）是转录激活因子发挥功能所必须的。

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