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1. 最近在做重组子的构建,可是做完转化后,提取的质粒为什么浓度很低只有...

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“单酶切可以切开，而且质粒的大小明显小于空质粒”，首先你的表达有误，单酶切可以切开，说明目的基因有连接上，那么重组载体该是比空载大的。质粒稀释100倍后PCR，有目的条带，也说明了是阳性克隆。有拖带，你可以把退火温度提高试试。后面上样9ul目的条带很浅，应该是你稀释倍数太高了。

载体自连是常见的现象。载体自连后在非重组缺陷的菌株中往往会发生重组或缺失现象，这会导致你这样的现象。污染的外源DNA片段。比如PCR产物中模板、非特异扩增产物等。3 感受态细胞或转化时、或涂布平板时污染了其他带有相同抗性的其他质粒的大肠杆菌。这在实验室也是常见的。

第二个标记可以是抗生素的抗性基因，例如在pBR322中的抗性基因。在这种情况下携带重组质粒的转化子印影到含有第二种抗生素的平皿上便不能生长，但可以从母平皿上回收得到。（一）限制性核酸内切酶核酸限制性内切酶能够专一识别DNA双链上某碱基顺序（图4-1）。

所谓转化是目的基因进入受体细胞并在受体细胞中维持稳定和表达的过程。（1）质粒dna的质量和浓度，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，则会使转化率下降；ml左右，且注意防止被其它试剂。

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