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构建重组载体DNA用什么酶-重组载体构建步骤

构建重组载体DNA用什么酶-重组载体构建步骤

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  1. 重组DNA技术中,常用到的酶是()。

1、重组DNA技术中,常用到的酶是()。

重组DNA技术中,常用的工具酶有:限制性核酸内切酶、DNA连接酶、反转录酶、DNA聚合酶I、多聚核苷酸激酶、末端转移酶、碱性磷酸酶等。DNA解链酶在DNA复制过程中起作用。

限制性核酸内切酶(RestrictionEndonucleases):酶能够识别特定的DNA序列,在该序列上切割DNA分子。起到了“剪刀”的作用,可以产生特定的片段。DNA连接酶(DNALigases):酶能够将两个断裂的DNA片段连接起来。通过催化磷高效地将两端相互配对并形成磷铵键,从而恢复完整的连续链。

Ⅲ类限制性核酸内切酶 只由一条肽链构成,仅需Mg2 ,切割DNA特异性最强,且就在识别位点范围内切断DNA。是分子生物学中应用最广的限制性内切酶。通常在重组DNA技术提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言。

基因克隆(gene cloning)或分子克隆,又称为重组DNA技术,是应用酶学方法,在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合分子,并使之在适当的宿主细胞中进行扩增,形成大量的子代DNA分子的过程。例如,要获得人类基因组中的某个基因,我们就需要借助基因克隆技术,进行目的基因的分离、克隆和扩增。

DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。“分子运输车”——载体(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。

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