构建的质粒载体有污染吗,构成质粒载体的要素
作者:admin • 更新时间:2024-07-19 06:36:02 •阅读
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于构建的质粒载体有污染吗的问题,于是小编就整理了1个相关介绍构建的质粒载体有污染吗的解答,让我们一起看看吧。
1、酶切原来的质粒作为新的载体会污染吗
质粒作为载体必须具备的条件:多个酶切位点、对受体细胞没有危害并易于分离、能自我复制并稳定保存、具有特殊的标记基因,质粒广泛存在于生物界,从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物,甚至人类机体中都含有。
到2月。酶切后的质粒在温了0摄氏度下可保存60天,常温下可保存3至4个星期。酶切是对粘末端的DNA分子和载体分子进行切割,以获得相应的粘末端连接。
需要,被切掉的部分同样带有粘性末端(因为粘性末端的碱基互补),会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法纯化,可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。
可能是复制中间体。还有一条和你的质粒大小一样的,跑不动又模糊一片的。最好的质粒提取出来只有一条超螺旋的带,就是基因组污染。
载体自连是常见的现象。载体自连后在非重组缺陷的菌株中往往会发生重组或缺失现象,这会导致你这样的现象。污染的外源DNA片段。比如PCR产物中模板、非特异扩增产物等。3 感受态细胞或转化时、或涂布平板时污染了其他带有相同抗性的其他质粒的大肠杆菌。这在实验室也是常见的。
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