本篇文章给大家谈谈双酶切载体构建经验，以及双酶切连接载体与片段比例对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享双酶切载体构建经验的知识，其中也会对双酶切连接载体与片段比例进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 构建重组表达质粒前,还需要将空表达载体和重组克隆质粒进行双酶切...

1、构建重组表达质粒前,还需要将空表达载体和重组克隆质粒进行双酶切...

是的，在构建重组表达质粒之前，通常需要对空表达载体和重组克隆质粒进行双酶切。双酶切是指使用两种限制性内切酶对DNA进行切割，以产生互补的黏性末端或平滑末端。这样可以将重组克隆质粒的目标片段与空表达载体进行连接，形成重组表达质粒。具体操作步骤如下： 选择适当的限制性内切酶，确定其酶切位点。

双酶切就是为了验证是否有目的基因，如果双酶切条带正确，而且PCR也没有问题，就可以确定质粒构建成功。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段（10kb）且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。

方法 采用RT-PCR方法，从人的成神经细胞瘤的总cDNA中，扩增出5kb的BACE cDNA片段，再用BamHI和XhoI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA1中，用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒；以免疫细胞化学法检测BACE基因的表达情况。

\验证重组质粒的构建是否成功，如果成功了，电泳应该是载体片断和插入序列两条条带，分别对应应有的长度。

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