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1. 基因功能与敲除载体构建的关系?

1、基因功能与敲除载体构建的关系?

基因功能与敲除载体构建之间存在密切的关系。敲除载体是用于研究基因功能的工具，它能够通过特定的技术将目标基因从细胞或生物体中剔除或失活。敲除载体构建的过程通常包括以下几个步骤：选择目标基因：根据研究需求选择感兴趣的基因进行敲除。设计引物：设计特异性引物，用于扩增目标基因的片段。

基因敲除，简称geneknockout，是一种科学实验方法，旨在通过分子手段来探究未知基因的功能。它通过设计实验，将目标基因去除或用相似基因替换，随后观察实验动物的整体反应，从而推测基因的作用。这种方法借鉴了早期生理学研究中切除部分、观察整体、推断功能的典型思路。

基因敲除技术，即是可以针对一个 DNA 碱基序列已知但功能未知的基因，通过抑制该基因的表达，分析突变体表型变化后来确定该基因的功能。

利用同源重组构建基因敲除动物模型的基本步骤：a.基因载体的构建：把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA分子都重组到带有标记基因（如neo基因，TK基因等的载体上，成为重组载体。基因敲除是为了使某一基因失去其生理功能，所以一般设计为替换型载体。

构建敲除细胞株，首先要设计靶向目的基因的gRNA，gRNA需要克隆到合适的表达载体中并进行gRNA的序列验证。

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