腺病毒载体构建的具体方法(简述腺病毒载体在基因治疗领域的用途)
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1、腺病毒载体的腺病毒载体系统
目前,最主流的腺病毒载体系统有Adeasy系统和AdMax系统。Adeasy系统:通过原核重组极大提高了腺病毒的重组效率。其具体的构建步骤如下图。 AdMax系统:Cre/LoxP体系改造后的真核腺病毒包装体系,进一步增加的操作的便捷,同时滴度较Adeasy有进一步提高。步骤如图所示。
典型的腺病毒载体系统如:穿梭质粒pCA13/腺病毒基因组质粒pBHG11/包装细胞293细胞。
腺病毒(adenovirus)是线状双链DNA病毒,基因组内有14个基因。腺病毒载体的主要特点是:(1)宿主范围较广,不仅能感染能进行分裂的细胞,也能感染不再分裂的细胞如神经细胞。反转录病毒只感染具分裂复制能力的细胞。
能有效进行增殖,滴度高 腺病毒系统可产生1010到1011VP/ml,浓缩后可达1013VP/ml,这一特点使它非常适用于基因治疗。与人类基因同源 腺病毒载体系统一般应用人类病毒作为载体,以人类细胞作为宿主,因此为人类蛋白进行准确的翻译后加工和适当的折叠提供了一个理想的环境。
第一代腺病毒载体:一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体称为第一代腺病毒载体,此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎症反应和免疫反应,纯化后可以安全使用,体内表达周期可达4周。
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