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1. 双元表达载体系统原理

1、双元表达载体系统原理

双元表达载体系统的核心是辅助Ti质粒和微型Ti质粒。辅助Ti质粒，由于缺乏T-DNA区，失去了致瘤能力，但提供了vir基因，该基因能识别并切割LB和RB区域，激活T-DNA的转移。微型Ti质粒则包含植物选择标记，如NPTII基因和Lac Z基因，位于T-DNA边界序列之间。

双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的vir基因可以反式激活T－DNA 的转移。与共整合载体所不同的是，它不依赖两个质粒之间的同源序列，不需要共整合过程就能在农杆菌内独立复制。

双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的Vir基因可以反式激活T－DNA 的转移。

双元表达载体系统主要由两个关键组件构成：首先，是卸甲Ti质粒。这种质粒失去T-DNA区域，从而失去了导致癌变的能力，其主要功能是提供编码Vir蛋白的Vir基因。Vir基因编码的virD2蛋白具有识别功能，它能识别农杆菌转运DNA（T-DNA）两端的24bp序列。

农杆菌转化法的原理是构建双元表达载体系统，由两种质粒组成，一种是位于大肠杆菌中的穿梭质粒，另一种是位于农杆菌中的辅助性质粒。

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