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1. 构建的载体测序为什么不用基因的特异性引物而是用载体的通用引物...

1、构建的载体测序为什么不用基因的特异性引物而是用载体的通用引物...

公司推荐使用的是通用引物，因为它们能确保测序结果的完整性。基因特异性引物由于其特异性，可能在测序过程中只能捕获目标基因的一部分，而通用引物则能够覆盖整个基因区域，提供更为全面的信息。再者，考虑到测序技术的局限性，测序前后可能存在几十个碱基对的不准确区域。

通用引物和特异性引物的区别：前者是用来测序的通用做法，后者是一种测定基因突变的方法。通用引物 通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配，或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DNA片段，都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序，但是只是“通用”，也不是万能的。

使用通用引物的另一个好处可以检测缺少目的片段引物的片段，毕竟有时候我们构建质粒时插入的外源基因不一定需要通过PCR扩增获得，可能只需要通过合适的酶从另一个含有该片段的质粒上切下来再连到目的质粒上就可以了，这种情况下，不一定备有相应的目的片段引物。

补充一个更重要和实际的考虑：实际测序中，可靠的测序结果往往是从引物后二三十个碱基才开始的。如果片段比较长，超过一次测序能力如七八百之外，即使双向测序也无法获得引物（排除非特异扩增）或紧邻引物处的序列时，就需要克隆到载体再测序。

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