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1. 目的基因与载体结合需要ATP吗,那用PCR技术扩增时需要吗

1、目的基因与载体结合需要ATP吗,那用PCR技术扩增时需要吗

答案是否定的！酶用的准确就行了。PCR 是扩增DNA的，需要四种dNTP以及引物DNA，只要环境温度达到一定条件就行，所以也不需要。酶切质粒是切开一个切口，然后才将需要表达的DNA 片断加入质粒中。

不需要ATP，它是用dNTP（即三磷酸脱氧核苷酸）作原料的，与模板链结合时先生成焦磷酸，焦磷酸不稳定，容易转化为两个磷酸并释放能量。

PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中，由于往往不清楚目的基因的DNA序列，获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法，重组到T-载体中，通过序列测定清楚DNA序列。

这样，在连接反应中，载体DNA的两个末端之间就无法被连接酶共价连接了。如果是采用的定向克隆法的话就不用考虑载体的自身环化。如果是平末端连接法，就要满足a.具有高浓度的T4DNA连接酶b.高浓度的平末端外援DNA连接和质粒DNAc.低浓度的ATPd.不存在亚精胺一类的多胺。

线粒体 提供 的能量 （ATP） 。

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