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构建载体时移码问题的原因-构建载体为什么一直不成功

构建载体时移码问题的原因-构建载体为什么一直不成功

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  1. 基因表达载体构建时,靶基因前序列移码吗

1、基因表达载体构建时,靶基因前序列移码吗

基因表达载体构建时,靶基因前序列移码 半保留复制是一种DNA的复制模型,其中亲代双链分离后,每条单链均作为新链合成的模板。因此,复制完成时将有两个子代DNA分子,每个分子的核苷酸序列均与亲代分子相同。子代DNA分子中,一条链来自亲代,另一条链为新合成的链。

一般建议在ATG上游加入保守序列5;-UAAGGAGGUGA-3;(其中AGGAGG是RBS保守序列),并根据预实验结果调节,如果载体本身已经带了RBS序列就可以不加。同时在ATG与RBS之间要有一定的空间序列(约小于10个碱基), 可以采用靶基因ATG上游的序列。这些涉及方法是经验之谈,对每一个基因都需要实验优化。

但是,在修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象,造成移码突变,( 移码突变 :是指DNA分子由于某位点碱基的缺失或插入,引起阅读框架变化,造成下游的一系列密码改变,使原来编码某种肽链的基因变成编码另一种完全不同的肽链序列。)使靶标基因失去功能,从而实现基因敲除。

Cas9可以对靶基因组进行剪切,形成DNA的双链断裂。在通常情况下,细胞会采用高效的非同源末端连接方式(NHEJ)对断裂的DNA进行修复。但是,在修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象,造成移码突变,使靶标基因失去功能,从而实现基因敲除。

到此,以上就是小编对于构建载体时移码问题的原因的问题就介绍到这了,希望介绍关于构建载体时移码问题的原因的1点解答对大家有用。

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