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1. lic克隆原理？

1、lic克隆原理？

先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞核者基因相同的动物。

这一过程中如果对供体细胞进行基因改造，那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相同的变化。

克隆技术不需要雌雄交配，不需要精子和卵子的结合，只需从动物身上提取一个单细胞，用人工的方法将其培养成胚胎，再将胚胎植入雌性动物体内，就可孕育出新的个体。这种以单细胞培养出来的克隆动物，具有与单细胞供体完全相同的特征，是单细胞供体的“复制品”

LIC以同源重组为基本原理，利用T4 DNA聚合酶的3′-5′外切酶活性使template和insert产生黏性末端，通过同源序列在体外完成交换重组，并进一步利用E.coli细胞内的ligase自行修复目的质粒，实现基因克隆目的。

使用Bpn1对模板DNA（甲基化）进行消化，有利于消除假阳性信号，是LIC的关键步骤之一。经菌落PCR鉴定为阳性的菌落，通常含有目的质粒。

同源序列是精心设计的重复片段，是IDT合成的引物，能在很大程度上保证不会出现阅读框漂移。

总之，LIC技术在目的基因克隆、蛋白的融合表达方面具有很强的应用前景。希望小伙伴们自此对该领域有一个比较深入和系统的认识，挖掘LIC技术在基因重组领域的应用潜力。

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