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1. 载体构建的原理及方法

1、载体构建的原理及方法

原理步骤如下：载体构建的原理：载体构建是指将外源DNA片段导入到特定的载体中，以便将其传递到目标细胞中。常用的载体是质粒，其具有自主复制和传递的能力。质粒由多个功能区域组成，包括起始子、选择性标记基因、多克隆位点等，区域可以用于插入和操作外源DNA。

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

首先，要进行目的基因的获取。这是载体构建的第一步，也是最关键的一步。可以通过PCR扩增、基因文库筛选、化学合成等方法获取目的基因。其中，PCR技术是最常用的方法，可以快速、特异地扩增目的基因。

基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体，首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。

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