病毒载体构建及分析-病毒载体的概念
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1、病毒转染原理及步骤
无论是质粒转染,还是病毒转染,均是真核细胞主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。
【答案】:(1)病毒颗粒将正链RNA基因组携带到宿主细胞中。(2)宿主tRNA与病毒RNA下游的U5区域进行退火。(3)反转录酶以tRNA作为引物开始合成负链DNA。(4)反转录酶终止在模板的末端,形成强终止负链DNA。
慢病毒细胞转染是指利用慢病毒作为载体,将某种外源基因和重组质粒等DNA分子导入到目标细胞中的一种技术手段。慢病毒可以带有细胞进入人体细胞内,随后融入宿主细胞的DNA中。此种技术应用广泛,可以用于基因治疗、基因表达等研究中。
转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
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