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1. T载体连接步骤是怎么样的?都要注意些什么呢?

1、T载体连接步骤是怎么样的?都要注意些什么呢?

要确保产物末端有A尾，如果是高保真酶扩增的产物需先加A尾，纯化后再连接；再就是载体和产物的比例要合适。

在连接反应中，DNA连接酶会催化T载体与目的DNA片段之间的磷酸二酯键的形成，从而将两者连接在一起。这种连接是共价连接，形成的重组DNA分子在结构和功能上都是稳定的。举个例子，如果我们想要将一个特定的基因插入到T载体中进行克隆或表达，我们首先需要将这个基因通过PCR扩增或其他方法获得其DNA片段。

试剂T 载体，T4 DNA 连接酶，连接酶缓冲液，无菌dd Water操作步骤PCR产物与T载体直接连接：（1） 事先将干式恒温仪（或冰盒里的水）温度设定在14~16°C。

你先把含T载体的菌摇起来，提质粒，双酶切，割胶回收酶切片段（小的那一段，就是你要的基因）。2301载体你看看有没有那两个酶切位点，同尾酶也可以，双酶切，回收切开的载体。然后把载体和基因片段连接，转化感受态细菌，挑平板，就行了。

不完全是一回事。T载体一般大家都是买来的，因为本身T载体不是环形的，这个载体末端带有T尾，所以经过PCR后，被Taq酶加过A尾的片段，直接就可以通过载体上的T尾，在连接酶的作用下，连到T载体上，构建好克隆质粒。好多实验室直接买商品化的T载体，因为不能扩增，所以用完还得再卖。

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