大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建线粒体载体的方法是的问题，于是小编就整理了4个相关介绍构建线粒体载体的方法是的解答，让我们一起看看吧。

1. 将外源基因导入原核细胞或真核细胞分别有哪些方法?
2. 载体构建的原理及方法
3. 线粒体中电子传递的载体有哪些
4. 将目的基因构建在表达载体上的方法有哪些

1、将外源基因导入原核细胞或真核细胞分别有哪些方法?

【答案】：（1）将重组质粒导入原核细胞称转化，通常用氯化钙法使大肠杆菌细胞处于感受态，从而将外源DNA导入细胞。另一个常用方法是用脉冲高压电瞬间处理，使外源DNA高效导入细胞，称为电穿孔法。

传导：利用噬菌体（细菌感染病毒）作为载体，将外源DNA引入到原核细胞中。接合：通过细菌之间的直接接触，将某一细菌中的DNA传递给另一细菌，从而使外源DNA被接受并与细菌染色体发生重组。

主要方法：【1】导入植物受体细胞：（1）农杆菌转化法。

意思不同 （1）转化：含外源基因的重组质粒（载体）将外源基因直接导入原核细胞（如细菌）。（2）感染：在基因转移实验中强调重组病毒载体入侵受体细胞的过程。

2、载体构建的原理及方法

原理步骤如下：载体构建的原理：载体构建是指将外源DNA片段导入到特定的载体中，以便将其传递到目标细胞中。常用的载体是质粒，其具有自主复制和传递的能力。

设计引物加接头，扩增目的基因，连接到T载体上测序。

原理：将外源基因片段与载体连接（载体通常选用质粒或者噬菌体或其他病毒），将重组的载体转染受体细胞，使之整合入宿主基因组或者在稳定存在于胞质内，是宿主细胞能够表达载体上的外源基因，从而获得新性状或者新产物。

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

3、线粒体中电子传递的载体有哪些

递电子体：NAD黄素蛋白 铁硫蛋白 泛醌 细胞色素体系 递氢体：烟酰胺脱氢酶类、黄素脱氢酶类、铁硫蛋白类、细胞色素类及辅酶Q（又称泛醌）。它们都是疏水性分子。

参与传递的电子载体有四种∶黄素蛋白、细胞色素、铁硫蛋白和辅酶Q，在这四类电子载体中，除了辅酶Q以外，接受和提供电子的氧化还原中心都是与蛋白相连的辅基。

答案是泛醌，因为泛醌是脂溶性的，能够在线粒体内膜上自由扩散。

组成呼吸链的成员中除了电子载体外，有些还具有将氢质子跨膜传递到膜间隙的作用，将能够传递氢质子的复合物称为递氢体，或称递质子体。

在生物细胞中，接受代谢物上脱下的氢（或电子）的载体有三种—— NAD 、NADP 和FAD。 其中NADPH不进入呼吸链合成ATP，而是作为生物合成的还原剂；只有NADH和FADH2进入呼吸链。

4、将目的基因构建在表达载体上的方法有哪些

首先需要用工具酶剪切运载体上的DNA分子，然后用DNA连接酶将目的基因与被被切割的DNA分子连接。在这里的运载体有一定的要求，倘若不清楚可以追问。但是基因表达载体导入植物，动物，细菌的方法就不一样了。

第一种方法是，用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；（人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶，来源于大肠杆菌，可用于连接粘性末端；T4DNA连接酶，来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率低。

获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。

切割质粒和目的基因的限制酶必须是同-.种酶，以获得相同的黏性末端，利于重组质粒的构建。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。

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